保健酒（Liqueurs）是由基酒加中药配制而成，具有抗疲劳，调节免疫力之功效。保健酒将中药功能与酒的作用有效结合，极大地增强了药物的效能与作用，药借酒势，酒助药威，迅速增强人体微循环（扩张毛细血管），使有效成分直达病灶，诸多症状可迅速得到缓解或消失。保健酒的生物活性成分通常来自传统中药，特别是有滋补作用的中药。总皂苷即为保健酒中重要的功效成分，“皂苷”是由甾体或三萜类化合物作为苷元与糖分子缩合而成的一类低聚糖苷，是一类广泛存在于植物细胞内的有机化合物，它具有调节肾脏功能，抗缺氧和抗疲劳、抗低温应激作用、抗脂质氧化作用、抗致突变作用及双向调节免疫的保健功能。总皂苷的现有检测标准为2003 版《保健食品检验与评价技术规范》，该法是针对保健食品中“总皂苷”含量测定的一个广泛方法。皂苷结构中的糖基本身可与香草醛发生显色反应，保健酒中含有多种不同糖基数的皂苷致使与香草醛出现显色结果差异。为消除糖基对香草醛显色剂的干扰，本研究在卫生部方法的基础上将保健酒中皂苷水解成不含有糖基的苷元再与硫酸-香草醛显色，从而达到准确检测保健酒样中总皂苷含量的目的。
材料与方法
材料、仪器及试剂
供试品与对照品：保健酒A，海南椰岛酒业发展有限公司提供；人参皂苷Re，中国药品生物制品检定所。
仪器设备：紫外分光光度计；十万分之一分析天平；万分之一天平；漩涡混悬器；固相萃取仪；隔膜真空泵；氮吹仪；旋转蒸发仪。移液枪；塑料离心管；50 mL圆底烧瓶；巴氏吸管；固相萃取柱(bond Elut-C18 OH，500 mg 3 mL，50/PK，Agilent Technologies)。试剂耗材：香草醛（基准试剂）二氯甲烷、甲醇、乙腈、硫酸、盐酸为分析纯；77 %硫酸溶液（v/v）；氯化氢水溶液（4 mol/L）；70 %甲醇水溶液（v/v）。香兰素硫酸显色中间液：准确吸取8 %香兰素甲醇溶液500 μL 加入3000 μL 的77 %硫酸溶液中，振荡混合均匀，冷却至室温，现配现用。
实验方法
对照品溶液的制备
皂苷苷元溶液的制备
精密称取人参皂苷Re 适量，用甲醇定容，配制成人参皂苷Re 对照品溶液（4 mg/mL），精密移取500 μL 的乙腈于塑料离心管中，加入盐酸（4 mol/L）500 μL，涡旋混匀得到水解溶剂，再往其中加入4 mg/L 的Re 对照品溶液1 mL，涡旋混匀后放入80 ℃恒温水浴3 h，冷却后加入5 mL 的二氯甲烷和3 mL的去离子水，有机相用3 mL水洗两遍，分离去掉水层(上层)。二氯甲烷有机相层经氮吹仪吹干，用2 mL 乙腈溶解，得到浓度为1.0 mg/mL 的人参皂苷苷元溶液。
苷元标准曲线工作溶液
分别准确吸取苷元溶液（1.0 mg/mL）75 μL、150 μL、300 μL、600 μL 于刻度试管中，用乙腈定容至1 mL，涡旋混匀，得到浓度为0.075 mg/mL、0.15 mg/mL、0.30 mg/mL、0.60 mg/mL 的苷元标准工作溶液，现配现用。
显色
分别准确吸取浓度为0.075 mg/ mL、0.15 mg/ mL、0.30 mg/ mL、0.60 mg/ mL的苷元标准曲线工作溶液500.0 μL加入到4.5 mL的香草醛硫酸显色中间溶液中，涡旋混匀，同时吸取500.0 μL的乙腈按照上述步骤操作，得到溶剂空白显色组。所得混合物于70 ℃水浴加热10 min 后迅速放入冰水中冷却30 s，检测溶液在541 nm（扫描最大吸收波长）波长下的吸光度, 每个样品平行测定3 次。
供试品溶液的制备
皂苷提取
准确吸取1.0 mL 保健酒A于瓷蒸发皿中，水浴挥干乙醇和水，所得固体用1.0 mL 水溶解，备用。将此样品溶液加入经激活的萃取小柱中，然后用6 mL去离子水洗涤，保持1～2 滴/s 的速度除去样品中的糖类物质。再分别用70 %甲醇水溶液（6 mL）和甲醇(10 mL)进行洗脱，收集洗脱液于圆底烧瓶中。在旋转蒸发仪上除去甲醇和水，所得固体用甲醇1.0 mL溶解备用。
水解
精密移取500 μL 的乙腈于15 mL 塑料离心管中，加入盐酸500 μL，涡旋混匀得到水解溶剂，加入上述酒样甲醇溶液1 mL，涡旋混匀后放入80 ℃恒温水浴3 h，冷却至室温后加入5 mL 的二氯甲烷和3 mL的去离子水，有机相用3 mL水洗两遍，分离去掉水层(上层)。二氯甲烷有机相层经氮吹仪吹干，用2 mL乙腈溶解得到酒样水解的苷元溶液。
显色
分别准确吸取500.0 μL酒样苷元乙腈溶液加入到4.5 mL 的香草醛-硫酸显色中间溶液中，混合均匀，所得混合物于70 ℃水浴中加热10 min 后，迅速放入冰水中冷却30 s，上机测定吸光度，每个样品平行测定2 次。
讨论
本实验将保健酒A中的皂苷水解成苷元，消除了糖基对香草醛显色剂的干扰，采用液液萃取方式提取苷元的同时除去了酒样中的干扰色素。实验采用皂苷酸水解显色法测定保健酒A中的总皂苷含量，以水解后的人参皂苷苷元制备标准曲线。此改良法具有范围线性良好、准确度高、精确度好、重复性良好等优点，因此非常适合用于保健酒中总皂苷含量的定量分析和质量控制。
