茶多酚( tea polyphenols,TP) 是从茶叶及其副产品中提取的天然抗氧化剂,是以α-苯基苯并吡喃为结构基础的类黄酮复合物,具有抗氧化、抗菌、抗病毒,改善畜禽生产性能和产品品质等功能。TP 有极强的抗氧化活性,可提供氢离子( H+ )与超氧阴离子自由基( ·O-2) 、羟自由基( ·OH) 、羧自由基( ROO·) 和硝基自由基( ·ONOO- ) 等自由基结合形成惰性化合物,终止自由基链式反应; 同时可螯合铁离子( Fe3+ ) 以抑制芬顿( Fenton)反应中·OH 的产生。摄入多酚类物质能维持体内氧化-还原稳态,提高超氧化物歧化酶( SOD) 、谷胱甘肽过氧化物酶( GPx) 、过氧化氢酶( CAT) 和谷胱甘肽还原酶( GR) 等抗氧化酶活性,以抑制局部或全身性炎症反应,刺激核转录因子( Nrf2) 活化,上调细胞内抗氧化酶表达水平。研究表明,饲粮中添加TP 可改善机体和禽蛋的抗氧化状态。玉米饲粮中添加120 mg /kg TP 能显著提高肉鸭生长性能和血清抗氧化水平,其改善效果优于维生素E 和二丁基羟基甲苯( BHT ) ;100 ~ 200 mg /kg TP 能延缓鸡蛋在储藏过程中哈夫单位的降低,降低蛋黄胆固醇和丙二醛( MDA)含量; 饲粮中含400 mg /kg 白藜芦醇( 又称芪三酚) 能降低鹌鹑血清和蛋黄中硫代巴比妥酸反应物( TBARS) 含量,提高血清维生素E 浓度。然而,TP 在动物应用中的量效关系上缺乏系统性研究,其在蛋鸡饲粮中的推荐使用剂量及用量上限鲜见报道。因此,本试验旨在研究饲粮中不同水平TP 对蛋鸡生产性能、蛋品质及血液、肝脏和蛋黄的抗氧化能力的影响,探讨TP 在蛋鸡饲粮中的适宜添加剂量,为实际生产提供理论依据。
材料与方法
试验材料
TP 由无锡太阳绿宝科技有限公司提供( 纯度≥80%,批次号: 505083) 。采用《茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法》( GB /T 8313—2008) 检测,TP 含量为66.73%,儿茶素为37.25%。试验饲粮中TP 以此实测结果为依据添加,逐级混合到配合饲料中。
试验动物与饲粮
试验选用450 只24 周龄的健康海兰灰产蛋鸡,采用单因子完全随机设计,将试验鸡分为5 个组,每组6 个重复,每个重复15 只鸡。试验包括预试期7 d、正试期56 d。在基础饲粮( 表2) 中分别添加0、40、80、200 和400 mg /kg 的TP 构成试验饲粮。
饲养管理
采用半开放式鸡舍3 层立体笼养,自然光照加人工补光,光照时间16 h /d、光照强度16 lx,相对湿度50%~ 90%,自然通风结合纵向负压通风。饲喂干粉料,自由采食和饮水,每天布料、匀料、捡蛋、清粪各2 次,每周消毒1 次。常规防疫和管理。
指标测定与方法
样品采集与制备
正试期,每天按重复记录产蛋数、称蛋重,计算平均蛋重和产蛋率。每2 周以重复为单位计算平均日采食量和料蛋比。分别于正试期的第2、4、6 和8 周末,每重复采4 枚蛋,测定蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋白高度、哈夫单位、蛋黄颜色和蛋形指数。于正试期的第4 和8 周末,每组随机选取体重相近的蛋鸡,空腹无菌翅静脉采血,3 000 r /min 离心10 min 制备血浆,-20 ℃保存,待测血浆抗氧化指标。8 周末,每组随机选取体重相近的蛋鸡,屠宰,摘取肝脏,液氮保存待用。组织匀浆的制备: 将肝脏用生理盐水冲洗,除去血液,滤纸吸干,称取约0.5 g,加9 倍生理盐水,剪碎,置匀浆机中制成10% 的组织匀浆,3 000 r /min离心10 min,取上清液,-20 ℃保存待测,备检肝组织抗氧化指标。
测定方法
蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋白高度、哈夫单位和蛋黄颜色采用以色列ORKA 公司生产的系列鸡蛋品质测定仪测定; 蛋形指数采用日本富士坪公司生产的蛋形指数测定仪测定,蛋黄和蛋壳重量采用万分之一天平测定; 总超氧化物歧化酶( T-SOD) 活性采用黄嘌呤氧化酶法测定; MDA 含量采用硫代巴比妥酸( TBA) 法测定; GPx 活性和总抗氧化能力( T-AOC) 采用比色法测定。所用试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
数据处理
试验数据以“平均值±标准差”表示。数据采用SPSS 19.0 单因素方差分析( one-way ANOVA)程序进行方差分析,采用Duncan 氏法进行多重比较。TP 添加水平的线性和二次线性效应采用正交多项式进行分析。以P< 0.05 为差异显著性判断标准。
结果与分析
TP 对蛋鸡生产性能的影响
与对照组相比,饲粮中添加TP未显著影响产蛋率和平均日采食量( P>0.05) 。平均日采食量在试验后期( 4 ~ 8 周) 和试验全期( 1 ~8 周) 随TP 添加水平升高呈二次曲线变化( P <0.05) 。与对照组相比,饲粮中添加TP 对平均蛋重和料蛋比影响较为明显。试验前期( 1 ~ 4 周) ,随着TP 添加水平的升高,平均蛋重线性降低( P<0.05) ,400 mg /kg 组平均蛋重显著低于对照组和40 mg /kg 组( P<0.05) ; 各组平均蛋重在试验后期及全期无显著差异( P>0.05) ,但平均蛋重在试验后期随TP 添加水平升高呈二次曲线趋势变化( P<0. 05) 。试验前期,各组料蛋比无显著变化( P>0.05) ; 试验后期,料蛋比随TP 添加水平升高呈二次曲线变化( P<0.05) ,其中200 mg /kg 组料蛋比显著低于对照组( P< 0.05) ,其他TP 组与对照组无显著差异( P>0.05) 。整个试验期,料蛋比随TP 添加水平升高先降低后升高,200 mg /kg 组料蛋比最佳。