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动物水解蛋白的测定

2016-07-18 08:09:45
[导读]生鲜乳中动物水解蛋白的测定方法:用盐酸水解牛奶中的蛋白质,过滤后定容;取部分试样,于氮吹仪上吹干,再加入稀盐酸溶解、定容;注入氨基酸分析仪进行分离,外标法定量。如果样品中检测出L-羟脯氨酸,则认为牛奶中掺入动物水解蛋白。

L-羟脯氨酸是人体非必需氨基e酸,是胶原蛋白(动物水解蛋白)特有的氨基酸,占正常胶原蛋白氨基酸总量的10%以上,是衡量机体胶原含量的一个重要指标,牛奶中不含此氨基酸。

动物水解蛋白是一种廉价的工业原料,最常见的就是皮革粉。将其掺入牛奶或奶粉中可提高蛋白质的含量。如果人食用掺入动物水解蛋白的产品,则会导致消化不良,吸收利用率降低,从而影响人体健康。

1 测定原理

试样经酸水解后,过滤,用稀盐酸溶解,注入氨基酸分析仪进行测定。采用外标法定量。

2 试剂与材料

除非另有规定,应选用优级纯试剂和符合GB/T 6682规定的一级水。

盐酸7.8mol/L,将650mL优级纯的浓盐酸小心倒入350mL超纯水中,混匀。

配制茚三酮显色液,方法如表1所示。

配制苯酚水溶液(5.0%,w/v):称取苯酚5.0g,溶于100mL水中。

配制盐酸溶液(0.1 mol/L):量取盐酸(7.8mol/L)16.6mL,倒入1000mL水中。

L-羟脯氨酸标准品,纯度≥99%。

配制L-羟脯氨酸标准储备液:称取100mg(精确到0.1mg)羟脯氨酸标准品,用盐酸溶液(0.1mol/L)溶解并定容至100mL容量瓶中。该溶液的浓度为1000mg/L,于4℃冰箱内贮存,有效期3个月。2.8 准备苯酚溶液。

L-羟脯氨酸标准工作液:准确吸取L-羟脯氨酸标准储备液1.00mL于100mL的容量瓶内,用盐酸溶液(0.1mol/L)定容。该溶液的浓度为。10.00mg/L,于4℃冰箱内贮存,有效期1周。

仪器与设备

L-8900氨基酸自动分析仪、电热恒温干燥箱、配有聚四氟乙烯密封盖的水解管、电子天平(精确到0.0001g)、定量滤纸、0.45μm水性样品过滤器(直径13mm)、氮吹仪


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