本文首先阐述了DU-730 紫外/ 可见分光光度计的结构和原理, 特别是这台仪器具有的先进的“微聚焦光束技术”。然后，介绍了仪器的各种主要技术参数, 重点讨论了仪器的功能和所涉及的应用领域, 包括: 全波长扫描、固定波长测定、单一组分分析和蛋白质核酸的生物学测定等。最后作者为加强仪器的管理阐述了仪器的正确使用方法与维护, 为正在应用这台仪器的读者提供一些有用的经验。

  紫外/ 可见分光光度计作为一种分子吸收光谱仪, 广泛应用于化学研究、生物医药、环境科学和食品分析等研究领域。它具有分析精度高、应用范围广、分析简便快速和仪器灵敏度较高的优点, 是目前大多数实验室常用的定量分析仪器。分光光度计所采用的分光光度法在定量分析领域中的应用已有数十年的历史, 至今仍是实验室中最常用的分析方法之一。随着现代科学仪器的不断发展, 在传统的追求准确、快速、可靠的同时, 小型化、智能化、在线化、网络化成为了现代紫外/ 可见分光光度计新的增长点。

  本文重点介绍的美国BECKMAN 公司的DU-730 紫外/ 可见分光光度计, 是目前最具先进性的全波长分光光度计。BECKMAN 公司研发紫外/可见分光光度计历史悠久, 产品的性能优良, 长期以来一直受到用户的好评。近年推出的DU-730 型分光光度计又以崭新的面貌吸引着广大用户, 以它先进的“微聚焦光束技术”(micro-focused beam)适应当今飞速发展的生物医学研究的需要, 向更微量、更灵敏的分析技术尖端迈进。

1　 DU-730 紫外/ 可见分光光度计的结构和原理

1.1　结构组成

DU-730 分光光度计的基本组成和大多数分光光度计一样, 都是由光源、单色器、比色池、光电检测器和放大器几部分组成。

1.1.1　光源

DU-730 分光光度计的紫外/ 可见区的光源仍是采用卤素钨灯和氘灯。卤素钨灯的工作波长范围为:320 ～ 2500nm, 氘灯的工作波长范围为180 ～ 375nm。两光源有仪器上的一个灯选择反射镜自动进行选择和光源切换。

1.1.2　单色器( 分光系统)

单色器是分光光度计的重要部分, 比滤光片选择波长能更有效地提供带宽窄的单色光。DU-730是采用先进的光栅单色器, 由入射狭缝、出口狭缝、色散元件、准直镜等光学元件组成。入射狭缝是用来调节入射单色光的纯度和强度，也直接影响分辨率。而准直镜( 反射凹面镜) 的作用一是将入射光束变为平行光束后再进入色散元件，二是把来自色散元件的平行光束聚焦于出口狭缝上, 形成光谱像。出口狭缝是单色光的出口，它只让光谱带中所需要波长的光从狭缝中透出，而将其他波长的光挡住,不让其通过。

色散元件是单色器中的核心元件，起着将复合光分解为单色光的作用。DU-730 分光光度计的色散元件是凹面反射式全息光栅, 它本身就起着分解复合光和准直镜( 聚焦) 的作用, 而且全息光栅具有杂散光小、不产生伪线和分辨率高的优点。

1.1.3　比色池

DU-730 分光光度计配有多种规格样品池架和比色杯。池架有标准池架、七位池架、50μL 微量池架和多形态样品池架。比色杯有常量(2 ～ 4mL)、半微量(0.5 ～ 1mL) 和微量(50 ～ 100μL), 使用方便。另外还配有样品架卡套, 分为特为酶动力学设计的半导体温控池: 温度范围15 ～ 50℃ , 和流动池。

1.2　工作原理

DU-730 分光光度计的工作原理与其他分光光度计基本相同。由光源发出的复合光经反射镜进入单色器的入射狭缝，经准直镜变为平行光束投射到色散元件- 光栅上，分解为单色光。测定所需要的波长的光经滤光片轮的选择后，从出口狭缝中穿出，经反射镜反射聚焦，透射入比色杯中。此时，特征波长的光被样品溶液吸收掉，与其互补色的光透过比色杯照射在光电检测器上，光信号被转变为电信号，经放大、数据传输、保存，到测量结果的显示。BECKMAN 公司的DU-730 分光光度仪的先进之处在于: 在做微量分析时，当光束进入比色杯池前采用了该公司的专利技术—“微聚焦光束技术”,可以集中光源于样品上，避免光量的流失，因此, 不论是使用标准池，还是50μL 的微量池，仪器都能准确的进行测定，大大提高了仪器检测的灵敏度和结果的精密度。