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自动定氮仪法与国标凯氏定氮法测定油菜籽蛋白质含量的比较研究

2015-07-07 09:16:56
[导读]比较自动定氮仪法与国标法检测油菜籽中蛋白质含量的准确性与稳定性有无差异,以达到简化操作、节省时间的目的。

蛋白质是生命的物质基础,是构成人体及动、植物细胞组织的重要成分,同样蛋白质也是决定油菜籽品质的重要指标之一,因此,对油菜籽中蛋白质含量的检测显得尤为重要。检测蛋白质含量的方法很多,最常用的方法就是国标凯氏定氮法。凯氏定氮法是一种经典的检测蛋白质含量的方法,其国标规定的基本检测过程包括: 消化,即样品和消化剂、硫酸一同加热,使蛋白质消化分解并释放出氨,氨与硫酸结合生成硫酸铵; 蒸馏,即碱化蒸馏使硫酸铵中氨游离; 滴定,即用硼酸溶液吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定; 计算,即根据酸的消耗量乘以换算系数,即得出样品中蛋白质含量。整个过程至少需要用6 ~ 7 h 的时间,耗时较长且操作繁琐。而FOSS 2300 型自动定氮仪( 瑞典) 消化只需30 ~ 60 min,且蒸馏、滴定、计算全部都是自动进行,只需10 min 左右的时间,自动化程度较高,大大缩短分析的时间,简化了操作步骤。

1 材料与方法

1. 1 材料供试油菜籽材料10 份,均为贵州省油菜研究所提供,取自品种资源、育种材料及区域试验种子。主要仪器设备: FOSS 2300 型凯氏定氮仪( 瑞典) ; DB303-S 型电子天平; FOSS 消化炉( 瑞典) ; GZX-9070MBE 数显鼓风干燥箱; 高温炉; 滴定管( 酸式) ; 干燥器( 干燥剂为变色硅胶) 等。主要试剂: 硫酸,分析纯,含量为98%,无氮; 基尔特克催化片,相当于7. 0 g K2SO4和0. 8 g CuSO4 5H2O; 氢氧化钠,分析纯,配成40%水溶液; 1%硼酸吸收液,其中含混合指示剂0. 7%甲基红乙醇溶液、1% 溴甲酚绿乙醇溶液; 0. 1 mol /L 盐酸标准溶液; 硫酸铵、无水碳酸钠、赖氨酸、硫酸铁二铵、色氨酸等,均为分析纯。

1. 2 测定方法及内容

1. 2. 1 国标法。严格按照国标规定的方法测定蛋白质含量。

1. 2. 2 自动定氮仪法。

1. 2. 2. 1 样品粉碎与准备。取除净杂质有代表性的样品于FOSS 刀磨式粉碎机粉碎后,置于105 ℃电热恒温鼓风干燥箱中烘2 h ,取出,在干燥器中冷却后称取0. 5 g 样品( 精确至0. 000 1 g) 放于250 ml 的消化管中。

1. 2. 2. 2 样品的消化。加入2 片基尔特克催化片,加入16ml 浓硫酸,轻微振荡混匀样品,放在已预热到420 ℃消化炉上,加上蒸汽排水抽,消化30 ~ 60 min 后,将管架连同水抽一起取下冷却至少15 min。

1. 2. 2. 3 蒸馏。系统将蒸馏、滴定和计算全部自动执行,依次为: 80 ml 水稀释冷却消化液,加入30 ml 吸收液至吸收缸,加入50 ml 40% 的氢氧化钠于稀释的消化液,充分反应、蒸馏、标准液滴定( 标准液精确至4 位小数) 和计算,每一批样品需做1 个空白。

2结论

用2种方法对标准物质和10份油菜籽样品蛋白质含量进行检测比较,结果显示,2种测定方法在准确性、稳定性方面无显著差异。2 种方法比较回归分析显示,斜率为0.9998,接近于1.00,显示出的比例分析误差是0.0002%,这一误差小于试验允许的总误差。Y 轴截矩接近于0 ,表明固有系统误差很小,符合试验要求。回收率测定的平均值是99.31%,即相当于0.69% 的比例误差。这一误差小于试验允许的总误差,再次验证了该方法具有良好的准确性。综上所述,该研究表明了自动定氮仪法检测蛋白含量结果准确、快速,较国标规定的方法大大缩短了工作时间,提高了工作的效率,适于广泛推广。



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