抗坏血酸( VC) 具有较好的还原性,可用于延长食品保质期和调节口味,提高人类、鱼类的抗病以及皮肤的抗衰老能力。近年来已经报道的测定维生素C 的方法有: 滴定法、分光光度法、荧光分光光度法、毛细管电泳法、原子吸收法、近红外法、高效液相色谱法、电化学法、碘量法、酶法]等。这些方法表现出灵敏度较低、仪器复杂、操作繁琐的缺点。实验基于维生素C 对罗丹明B 和K2S2O8间经Ag + 催化的褪色反应的抑制作用,研究响应面分析法优化抑制-褪色光度法测定维生素C 的最佳条件。在单因素实验的基础上,应用响应面法优化抑制-褪色光度法测定维生素C 的实验条件。结果表明: 罗丹明B 的用量、HAc 用量二次方项、反应时间二次方项对Y 值的影响极显著( P < 0.01) ,罗丹明B的用量和反应温度、罗丹明B 的用量和反应时间的交互作用对Y 值的影响显著( P < 0.05) ,说明罗丹明B 的用量、HAc 的用量、反应温度和反应时间在抑制-褪色光度法测定维生素C 的实验中不是简单的线性关系。
回归分析及验证实验结果表明,该方法准确、可行。抑制-褪色光度法测定维生素C 的最佳实验条件为: 罗丹明B 用量6.99mL,HAc 用量2.81mL,反应温度20.0℃,反应时间11.82min。在此条件下,测得土泡参中VC的含量为0.08mg /g。该方法精密度好,光光度法快速检测食品禁用色素碱性橙的方法,该方法灵敏度高,精密度和重复性好,结果准确。对C18固相萃取柱进行了使用寿命测试,回收率均接近100%,表明此C18固相萃取柱经再生处理后至少可以重复使用十次。 在固相萃取条件的选择中,当碱性橙浓度在2~8μg /mL范围内,以20%甲醇水溶液作清洗剂清洗三次净化,以80%的甲醇水溶液作洗脱剂洗脱四次富集,回收率在84.15%~102.24%。在浓度为4μg /mL 的加标水平下,重复性实验的平均回收率为98.45%,相对标准偏差为1.87%( n = 5) ,结果良好。 为保证检测结果的准确性,避免出现柱超载现象的发生,实验中碱性橙上样浓度应小于6μg /mL。3.5 虽然在所购卖的腐竹样品中未发现含碱性橙的阳性样品,但本文所建立的方法依然可作为快速检测腐竹中碱性橙的依据。