农药浓度与抑制率关系

在一定条件下，有机磷和氨基甲酸醋类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物（乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在４１２ｎｍ处测定吸光度随时间的变化值，计算出抑制率。

应用速测仪分别测定５种不同浓度农药溶液对酶的抑制率，得出在加热与常温情况下检测浓度与抑制率之间的关系（见表１）。结果表明：１２种农药对乙酰胆碱酯酶的抑制率与农药浓度之间呈负相关，随着浓度的下降，酶抑制率也降低。不同农药之间对酶的抑制率存在一定的差异。在酶促反应过程，保持３７℃恒温对酶促反应具有重要作用，与室温下比较（实验时温度为２５～３０℃），大部分农药对酶的抑制率比室温时提高，在农药浓度高时两者差异不是很明显，当农药浓度很低时，加热时（３７℃）酶抑制率比不加热时差异较明显。但也有个别农药例外，如马拉硫磷在加热情况酶抑制率反而偏低一些。

农药检测限

当蔬菜样品中提取液对酶的抑制率≥５０％时，即为阳性反应，表示蔬菜中含有有机磷或氨基甲酸酯类农药。由检测结果可知，各种农药显阳性反应的加标溶液浓度区间（见表２，表３），在所检测的１２种农药中，除了敌敌畏、对硫磷、敌百虫、三唑磷４种农药对温度比较敏感，其它８种农药对温度不敏感。

实际检测效果

将芹菜、豆角、辣椒、小白菜和空心菜５种蔬菜品种经过前处理提取后，进行农药残留检测。从表４中可以看出，５种蔬菜提取液对酶的抑制率均小于５０％，说明农药残留没有超标。

试验方法的改进

试验使用检测试剂盒为东莞绿健，所以试剂的配制都是按照东莞绿健的提供方法配制的。国标与绿健的方法中酶、显色剂和底物都是各加１００μＬ，但在实验中酶加７５μＬ，显色剂和底物各加５０μＬ。在加完酶和显色剂之后需摇匀放置，国标要求放置１５ｍｉｎ，绿健要求放置１０ｍｉｎ，在该试验中放置１０ｍｉｎ，与绿健的一致。国标的方法是在反应３７℃中进行，而绿健要求在室温中放置，考虑到实验的准确性及实用性，同时做了２组实验（加热和温室）。结果表明，两者对酶抑制率差异不是很明显，这可能与惠州常年室温温度较高（年均气温在２２℃）有关。在实际检测时可能要考虑温度因素，在冬天温度较低时需要使用空调等取暖设备使室温保持在２０℃左右，保持反应能正常进行。在预实验时，反应时将酶、底物、显色剂各加入１００μＬ时，会导致酶与底物反应过快，在３ｍｉｎ之内就会超过检测范围。后来对酶、底物和显色剂的用量进行优化，酶加７５μＬ，底物，显色剂各加５０μＬ，这种组合的效果是比较好的。

３．２　检测方法的可靠性

试验应用ＰＲ－２０２－５农药残毒速测仪对１２种农药进行检测，同时以紫外可见ＵＶ－７５０４分光光度计为对照，结果表明农药残毒速测仪与分光光度计的检测数据差异不超过１０％（数据未列出），应用速测仪检测效果较分光光计好。说明ＰＲ－２０２－５农药残毒速测仪适用于基层检测站快速检测。另外，检测中有１１种农药检出限低于国标的检测限，只有丁硫克百威比国标稍高，可能与使用的试剂盒有关。